德國徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS 8 CRS 相干拉曼散射顯微鏡

了(le)解無標記化學顯微(wei)成(cheng)像

當您(nin)需要研究傳統熒光顯微成像(xiang)方法無法成像(xiang)的(de)結構時，通(tong)過STELLARIS 8 CRS相干拉曼散射顯微鏡(jing)，您(nin)可以在工作流程中實現無標記化(hua)學成像(xiang)，應對那些(xie)具有(you)挑戰(zhan)性的(de)研究問題。

在德國徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS 8 CRS 相干拉曼散射顯微鏡中，您可以使用不同模塊對各種樣本進行高速高分辨率成像： 受激拉曼散射(SRS)、相干反斯托克斯拉曼散射 (CARS) 、二次諧波成像(SHG)、雙光子熒光和可見光共聚焦熒光。

使用這些模塊可(ke)以最大限度地利用從樣本中獲得的信息。

獲得用傳統方(fang)法無(wu)法實現的(de)目標(biao)成像能力

盡管(guan)傳統的熒光顯(xian)微成像方法是(shi)非(fei)常(chang)成功的研究工具，但是(shi)可成像的目(mu)標類型(xing)和(he)數量有(you)限。 STELLARIS 8 CRS可幫(bang)助(zhu)您克服以下限制：

對目(mu)標事件和(he)結構的(de)化(hua)學鍵直接成像，而傳(chuan)統方法基本上無(wu)法做(zuo)到這一點；

三維圖像信息，即使在(zai)復(fu)雜的(de)3D樣本(ben)內也能(neng)觀察到微(wei)小細(xi)節；

無論以視頻碼率成像還是長時間(jian)觀察敏(min)感(gan)樣本，都盡可(ke)能使(shi)樣本保持接近生理條件(jian)，在(zai)動力(li)學研究中(zhong)將(jiang)擾亂性(xing)刺激降到低限度。

疊加圖像(xiang)顯示了(le)完好(hao)無損的(de)未標記斑(ban)馬魚(yu)眼睛。 綠色： 脂質(zhi)(zhi)成(cheng)分(fen)的(de)受激拉(la)曼(man)散射 (SRS) 成(cheng)像(xiang)（波數為(wei) 2850 cm?1）。 紅色： 蛋(dan)白質(zhi)(zhi)組分(fen)的(de) SRS 圖像(xiang)（波數為(wei) 2935 cm?1）。 藍色：二次諧波信號，主要來自鞏膜和角膜。 樣(yang)本由(you)Elena Remacha Motta和法國(guo)斯堡遺傳與分(fen)子細胞生(sheng)物學研究(jiu)所(suo)(IGBMC) Julien Vermot提(ti)供。

對結(jie)構和事件進行成像，無需(xu)熒光染料(liao)

使用STELLARIS 8 CRS顯微鏡(jing)，用戶可(ke)以利用結(jie)構和事件的化學(xue)特性(xing)對其進行(xing)成像和區(qu)分。 通過(guo)這種(zhong)方式，可(ke)以獲得傳統方法無(wu)法獲取的大量生化、代謝和藥代動(dong)力學(xue)信息。

樣(yang)本內不(bu)同(tong)分(fen)子內在(zai)振(zhen)動狀(zhuang)態不(bu)同(tong)，CRS利用這(zhe)種振(zhen)動差異形成(cheng)圖像(xiang)(xiang)中的對比度。 因(yin)此不(bu)需要對樣(yang)本染色(se)，從(cong)而消(xiao)除了基于染料(liao)的成(cheng)像(xiang)(xiang)方法的缺點，例(li)如(ru)光漂白和(he)染色(se)導致的假(jia)象。

多色(se)SRS成(cheng)像(xiang)展示(shi)了拉曼(man)標(biao)記藥理(li)學化(hua)合(he)物（黃色(se)，SRS成(cheng)像(xiang)，波數為2230 cm?1）在(zai)無標(biao)記細胞樣本內的(de)內源性脂(zhi)質(zhi)和蛋白質(zhi)環境中的(de)亞(ya)細胞分布。 樣本由Dewpoint Therapeutics GmbH的(de)Matth?us Mittasch博士提供。

內置(zhi)的(de)3D樣(yang)本三維(wei)成像(xiang)功(gong)能

STELLARIS 8 CRS非常(chang)適合直接(jie)利(li)用(yong)3D樣本（例如組(zu)織、類器(qi)官(guan)或較小的整個模式生物）的化學特性(xing)進行亞細(xi)胞分辨率(lv)成像。 CRS的3D成像天然(ran)無(wu)需后(hou)期處理，這是(shi)因為這種方(fang)法結合了以下兩個特點：

CRS信號通過僅在激(ji)(ji)發(fa)激(ji)(ji)光(guang)的焦點體積內發(fa)生(sheng)的非線性光(guang)學效應生(sheng)成，提(ti)供真正的三維圖像(xiang)信息。

用于激發CRS的近紅外(wai)激光束以極小的擾動(dong)在(zai)整(zheng)個樣(yang)本中傳播，因此在(zai)完(wan)整(zheng)的3D樣(yang)本內也能高效成像。

腦組織(zhi)的(de)三維(wei)成(cheng)像(xiang)： 200微米厚的(de)小鼠腦切片的(de)Z軸層掃(sao)圖像(xiang)，SRS成(cheng)像(xiang)同時顯(xian)示有髓軸突（橙色）和來自Thy1-YFP標記神經元（青色）的(de)雙光(guang)(guang)子熒(ying)光(guang)(guang)。 樣(yang)本由(you)德國慕尼黑工業大學神經細(xi)胞生(sheng)物學研究所Monika Leischner-Brill博士提供。

在(zai)盡可(ke)能接近(jin)生理(li)條件的情(qing)況下(xia)對活體樣本成像

CRS高效激發(fa)的分子鍵可以速度實現化(hua)學(xue)特(te)異性圖像反差(cha)。 它(ta)能(neng)夠以視頻(pin)碼率(lv)對活(huo)體(ti)樣本成像。

STELLARIS 8 CRS搭載徠卡高速共振掃描頭，可以對許多樣(yang)本形態進行常(chang)規和高速成像。

除了速度外，溫和(he)成像對于在長時間觀察中(zhong)保護活體樣本同樣至關重要。 非染(ran)色方(fang)法(fa)與近紅外激光相結合，可將(jiang)光毒性和(he)光損(sun)傷(shang)保持在低(di)水平(ping)。

活(huo)體小腸類器官亞(ya)細胞(bao)動(dong)(dong)力(li)(li)學的(de)無標記研究。 SRS信號的(de)延(yan)時視頻（波(bo)數為2940 cm?1）顯(xian)示了內源性蛋白質和(he)脂(zhi)質，有助于深入了解此模(mo)型系統中的(de)上(shang)皮(pi)細胞(bao)組(zu)織和(he)脂(zhi)滴動(dong)(dong)力(li)(li)學。 樣本由荷蘭(lan)根(gen)特大學Ruslan Dmitriev博士提供(gong)。

探索(suo)形態化學和功(gong)能信(xin)息在成(cheng)像實(shi)驗中的潛力

為(wei)了解決生命科學和基礎醫(yi)學研(yan)究中(zhong)具挑戰性的問題，通(tong)(tong)常(chang)必須(xu)最大(da)限度地利用從樣本(ben)中(zhong)獲得的信息。 這通(tong)(tong)常(chang)包(bao)括(kuo)需要對非傳統(tong)目標成像(xiang)，例如脂質(zhi)代(dai)謝(xie)的變化。

STELLARIS 8 CRS為您提供了(le)一個集成的(de)系統， 讓您除了(le)共(gong)聚焦熒光強度和(he)壽命信息以外，還可(ke)以獲取和(he)關聯各種生(sheng)化(hua)與生(sheng)理對比，從而充分利用(yong)實驗(yan)樣品。

無標記腦組織中的β-淀粉樣蛋白(bai)和相(xiang)關病(bing)理性脂質沉積物成像。 光譜分析顯示，與附近的健康大腦結構相(xiang)比，膜脂質富集，這為研究(jiu)脂質代謝與阿爾(er)茨海默病(bing)病(bing)理之間的關系提(ti)供了新的機會。 樣本由(you)德國波恩(en)神經退行性疾(ji)病(bing)研究(jiu)中心Martin Fuhrmann博(bo)士和Andrea Baral博(bo)士提(ti)供。

獲取(qu)樣本(ben)生化組分 的相關信(xin)息

形態和生化(hua)信息(xi)的(de)組合對于了解健康的(de)生物功能以及由疾(ji)病引起的(de)任何變化(hua)至關重(zhong)要。

STELLARIS 8 CRS以空間分辨率提供無標記(ji)的(de)化學(xue)對比(bi)成(cheng)像。 從亞細胞器到組織(zhi)中的(de)細胞群，以及會改變組織(zhi)功能的(de)病理(li)結構，使用CRS可在許(xu)多空間尺度上探測生(sheng)物功能。

對(dui)未經處(chu)理的(de)(de)新(xin)鮮蘋果(guo)片的(de)(de)內源性生化組分進行(xing)成像(xiang)(xiang)。 (A)SRS光(guang)(guang)(guang)譜(pu)層掃圖像(xiang)(xiang)的(de)(de)代表性圖像(xiang)(xiang)。 (B) (A)中所示感興趣區(qu)域(yu)的(de)(de)SRS光(guang)(guang)(guang)譜(pu)。 黃色(se)：最(zui)外層的(de)(de)果(guo)皮，包含(han)蠟質相的(de)(de)長鏈飽(bao)(bao)和脂肪酸(suan)。 綠色(se)、紅色(se)：內表皮層由短鏈不飽(bao)(bao)和脂肪酸(suan)構(gou)(gou)成。 藍(lan)色(se)、紫(zi)紅色(se)：多酚化合物(wu)。 青色(se)：由多糖(tang)構(gou)(gou)成的(de)(de)細胞(bao)壁。 橙色(se)：類胡蘿卜色(se)素。 (C) 8色(se)光(guang)(guang)(guang)譜(pu)分解結果(guo)，顯示不同的(de)(de)生化結構(gou)(gou)。

展(zhan)示(shi)與發育和疾(ji)病相關的 新維度(du)

對細胞表型和代(dai)謝狀(zhuang)態直接(jie)成像，對于了解健康和疾病狀(zhuang)態下的(de)生物過程至關重要。 樣本處(chu)理可能(neng)會改變(bian)這(zhe)些屬性，因(yin)此無標(biao)記(ji)方法可能(neng)更(geng)加合適(shi)。

CRS成(cheng)像(xiang)提供(gong)了光譜功能，支持您在盡可能接近真實情況(kuang)的(de)條件下(xia)詳(xiang)細(xi)研究樣本。

無標記SRS成像顯示(shi)了多細(xi)胞(bao)皮膚癌球狀體(ti)模型(xing)的(de)核殼結構(gou)，展示(shi)了出(chu)乎(hu)意料(liao)的(de)富(fu)脂(zhi)細(xi)胞(bao)表型(xing)（分離的(de)亮黃色細(xi)胞(bao)）的(de)外觀。 樣本由德國曼(man)海(hai)姆應用技(ji)術大(da)學Julia Klicks博(bo)士和Rüdiger Rudolf教授提供。

將共聚焦熒光(guang)成像(xiang)與 化學成像(xiang)相結合(he)

STELLARIS 8 CRS將多種(zhong)成像方(fang)法緊密集成到(dao)共聚焦系統中，使您以(yi)方(fang)式(shi)觀察到(dao)樣本的多種(zhong)生(sheng)(sheng)物維度。 這些方(fang)法可(ke)以(yi)通過生(sheng)(sheng)化、生(sheng)(sheng)理和分子對比來實(shi)現(xian)多模態光學(xue)成像。

受激拉(la)曼散(san)射(SRS)

相(xiang)干(gan)反斯托克斯拉曼散射(she)(CARS)

單光(guang)子(zi)或多光(guang)子(zi)熒光(guang)

二次諧波成像(SHG)

使用紅外線(xian)(IR)、可見(jian)光(VIS)和紫外線(xian)(UV)激光器以(yi)同時或序列模式成像(xiang)

將可見共(gong)聚焦熒光顯(xian)微成(cheng)像(xiang)與通過(guo)(guo)SRS進行的(de)(de)(de)多(duo)色化學成(cheng)像(xiang)相結合，并通過(guo)(guo)SHG增加物(wu)理對比度，對小鼠顱骨外(wai)植體中的(de)(de)(de)成(cheng)骨進行多(duo)模態光學成(cheng)像(xiang)。 在單(dan)個(ge)樣(yang)本(ben)中可以看到(dao)成(cheng)骨細(xi)胞的(de)(de)(de)位置(zhi)、細(xi)胞外(wai)膠原(yuan)纖維的(de)(de)(de)沉積和(he)骨礦物(wu)質的(de)(de)(de)形成(cheng)。 此外(wai)，可以主要(yao)在分散于整個(ge)發育(yu)期骨結構中的(de)(de)(de)孤(gu)立成(cheng)骨細(xi)胞內(nei)觀察到(dao)富(fu)含脂質的(de)(de)(de)結構。 樣(yang)本(ben)由德國德累斯頓MPI-CBG研究所的(de)(de)(de)Jacqueline Tabler和(he)Sebastian Bundschuh提供。

了解振動和(he)壽命成像帶(dai)來的新可能性

許(xu)多生物樣(yang)本(ben)會呈現由內源性熒(ying)光團或特(te)異熒(ying)光標(biao)記發(fa)射的(de)熒(ying)光。 SRS信號(hao)不(bu)受熒(ying)光影響(xiang)，但(dan)CARS信號(hao)可能會發(fa)生一定程(cheng)度(du)的(de)熒(ying)光串(chuan)擾(rao)。

STELLARIS平臺中(zhong)的TauSense工具可以(yi)幫助解(jie)決此問(wen)題。 通(tong)過使用基(ji)于熒光壽命(ming)的信息，您可以(yi)將瞬時CARS信號與熒光信號分離。

左(zuo)上： 腦組織脂(zhi)質的CARS顯微圖像(xiang)，顯示了(le)富(fu)含脂(zhi)質的白質和(he)灰質區域(yu)。 右上： 平(ping)均光(guang)(guang)子到(dao)達時(shi)間的圖像(xiang)顯示，富(fu)含脂(zhi)質的白質的光(guang)(guang)子到(dao)達時(shi)間較(jiao)短(duan)，灰質的光(guang)(guang)子到(dao)達時(shi)間較(jiao)長(chang)。 該結果表(biao)明(ming)，瞬時(shi)CARS信號(hao)伴有壽命特(te)定的雙光(guang)(guang)子自發熒光(guang)(guang)信號(hao)。 下排： 基(ji)于壽命的瞬時(shi)CARS信號(hao)和(he)自發熒光(guang)(guang)信號(hao)分離，平(ping)均到(dao)達時(shi)間為1.9納秒。 右： 疊加圖像(xiang)。

通(tong)過固(gu)有可 量(liang)化數據提(ti)高工作(zuo)效率

STELLARIS 8 CRS 提(ti)供了STELLARIS平臺具備的(de)所有多樣性(xing)和易(yi)用(yong)性(xing)。 這一集成系統讓(rang)您(nin)可以(yi)處理(li)各種具有挑戰性(xing)的(de)樣本(ben)，并幫助您(nin)最大限度地(di)利用(yong)CRS成像的(de)優(you)勢，包(bao)括從(cong)比率和光譜成像方(fang)法中(zhong)獲(huo)得固有可量(liang)化(hua)數據。

浸入水中的十二(er)烷（一種飽(bao)和的碳氫(qing)化(hua)合物(wu)，青(qing)色(se)）與（一種多不(bu)飽(bao)和脂肪酸，紫(zi)紅色(se)）液滴的SRS圖像和光譜(pu)。 1660 cm?1至1440 cm?1的強度(du)比率可量化(hua)脂質不(bu)飽(bao)和度(du)。

使用整合(he)的系(xi)統輕(qing)松設置(zhi)實(shi)驗

ImageCompass用戶界(jie)面(mian)提(ti)供一種(zhong)既方便又直(zhi)觀的CRS顯微成像(xiang)方法，使(shi)專家和新手(shou)都可(ke)以(yi)控制實驗的每個方面(mian)。

此(ci)外，ImageCompass集成(cheng)(cheng)了CRS激光(guang)控(kong)制功能，用(yong)戶只需(xu)點擊幾(ji)下鼠標便可從單(dan)化學鍵成(cheng)(cheng)像轉(zhuan)換為光(guang)譜成(cheng)(cheng)像或多模態成(cheng)(cheng)像。

在直觀的ImageCompass用戶界面中點擊幾下即(ji)可(ke)獲(huo)得CRS圖像(xiang)。

在(zai)大(da)型復雜樣(yang)本中輕(qing)松導航(hang)

LAS X Navigator是功(gong)能強大的(de)工具，可(ke)讓您(nin)從逐個圖(tu)像的(de)搜(sou)索方式快速轉變為查看整個樣(yang)本概況的(de)模式。 CRS多位置(zhi)實(shi)驗(yan)與Navigator集(ji)成，因此您(nin)可(ke)以對(dui)大型樣(yang)本執行完整的(de)區(qu)塊(kuai)掃描，獲得選擇感興趣區(qu)域(yu)所(suo)需的(de)全部信息，以便隨后(hou)作更詳細的(de)研究(jiu)。

大(da)面積樣本的(de)(de)(de)自動成像： 此處顯(xian)示了整個(ge)小(xiao)鼠(shu)腦切片的(de)(de)(de)高(gao)分辨率(lv)區塊(kuai)掃描。 對(dui)高(gao)脂(zhi)肪飲(yin)食(shi)(shi)和常規飲(yin)食(shi)(shi)中生長的(de)(de)(de)小(xiao)鼠(shu)的(de)(de)(de)對(dui)應(ying)皮質組織區域進(jin)行比(bi)較(jiao)，發現(xian)高(gao)脂(zhi)肪飲(yin)食(shi)(shi)的(de)(de)(de)小(xiao)鼠(shu)出現(xian)富含脂(zhi)質的(de)(de)(de)病理性動脈斑(ban)塊(kuai)，而(er)常規飲(yin)食(shi)(shi)的(de)(de)(de)小(xiao)鼠(shu)則沒(mei)有。 樣本由德國(guo)萊(lai)比(bi)錫大(da)學的(de)(de)(de)Judith Leyh和Ingo Bechmann教授提供。

來自高光譜或比率成像的可(ke)量化信息

CRS靈(ling)感源(yuan)自(zi)拉(la)曼光(guang)譜學界開(kai)發的各種(zhong)方法，支持比率和光(guang)譜成像，能夠提供樣本的可重現、可量化的化學組分信息(xi)。 這些基(ji)本的量化工具集成在LAS X軟件(jian)中。

sRS光譜成像提供關(guan)于腦結構化學(xue)組分的(de)詳細信息(xi)。 左(zuo)： SRS圖像顯示了健康、富(fu)含脂質(zhi)的(de)白(bai)質(zhi)結構（頂部）和β淀粉樣蛋白(bai)（左(zuo)下）周(zhou)圍的(de)病(bing)理(li)性脂質(zhi)沉積(ji)物(wu)(wu)。 右： SRS光譜顯示，與富(fu)含白(bai)質(zhi)相(xiang)比，病(bing)理(li)性沉積(ji)物(wu)(wu)富(fu)含膜(mo)脂。