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類器官厚樣本成像,徠卡共聚焦系統解決方案第一彈

更新時間:2024-04-10      點擊次數:78

自21世紀初,隨著干細胞研究和組織(zhi)工程的(de)重(zhong)大突(tu)破,類器官及其(qi)在顯微成像中的應用取得了顯著進展。已開(kai)發的(de)多種類器(qi)官模型,如大腦、肝臟和腸(chang)道類器官,為研究器官(guan)發育、疾病機制揭示(shi)及治療評估提供了新途徑。同時,類器官成(cheng)像技術的(de)發展極大地(di)促進了研(yan)究人員對(dui)這些復雜三維結(jie)構(gou)細節動態(tai)模式進行(xing)觀(guan)察(cha)的能力。盡管如此,類器官研究(jiu)仍(reng)面(mian)臨個挑戰,包括(kuo)維持樣本活性確(que)保成像深度分辨率,及處理分析大量(liang)數據的需求[1][2]

視頻1.肺腺癌類器官樣(yang)本,共聚焦四色成像,40x 甘油鏡,拍(pai)攝(she)厚度71微米(144層(ceng)),樣(yang)本來源伯楨生物bioGenous

DAPI-細胞核CK7-細胞質F-ACTIN-細胞膜TTF1-細胞(bao)核(he)(強增(zeng)值性(xing)細胞(bao))

共聚焦顯微鏡(jing)(jing)物(wu)鏡(jing)(jing)的(de)發展,特別是(shi)用于觀(guan)察厚樣(yang)本的(de)物(wu)鏡(jing)(jing),對匹配(pei)樣(yang)本和周圍介質的折射率至關重要,否(fou)則會影響成像(xiang)深(shen)度。高(gao)數值孔徑的(de)油(you)浸(jin)物(wu)鏡(jing)雖然提供(gong)高(gao)分(fen)辨率(lv),但當用于水樣本時(shi)由于折射率(lv)不匹配而面臨限制,導致球面像差。這影響了能夠有效成像的樣本深(shen)度,并降低了圖像質(zhi)量

圖片

圖1.折射率

為了解決這些挑戰,研究人員開始使用甘油作為一種折射率接近(jin)生物樣本的介質,將樣本置于甘油中,并使用甘(gan)油物鏡進行成像。隨著技術的進步,甘油物鏡的設計和性能不斷改進,成為現代顯微鏡中常見的物(wu)鏡類型之一。


表1. 常見封片劑類型及其介質折射率的表格

封片劑類型

介質折射率

應用

水基封片劑

約1.33

水溶性樣(yang)本(ben),如染色后的細胞和組織切片

硅油

約1.40-1.41

活細胞成像和深度(du)成像

VECTASHIELD®, ProLong®/ProLong® Gold

約1.44-1.46

抗淬滅封片劑,長時(shi)間保持熒光穩定性和減(jian)少光淬滅影響

Fluoromount-GTM 

約1.45-1.47

常用的yongjiu性封(feng)片劑

Mowiol® 或PVA

約(yue)1.41-1.49

用于(yu)熒光標(biao)記樣本,提供良(liang)好的折(zhe)射率匹配和穩定性(xing)

BABB, FocusClear, DBE

約1.45-1.56

用于(yu)透明化(hua)樣本的成像

如今,大多數固定樣本都使用基(ji)于甘油(you)的Mowiol、Vectashield或類似混合物進行封片。這些介質的折射率接近80/20甘油/水混合物的折射率(ne=1.45)。甘油物鏡(介質折射率1.46)是在這種介質中封裝(zhuang)的樣(yang)本的更佳選擇。


由于折射率匹配(pei),甘油物鏡減少了散射和光損失,在泛的(de)波(bo)長(chang)范圍都具有較好的透明度(du),提高了圖像質量和信號強度,因此可實現(xian)更深的成像深度(見圖3)。


圖片

圖2. 甘油物(wu)鏡與水鏡成像效果對比(深度:200微米),樣本來(lai)源伯楨生物(wu)bioGenous


配合校(xiao)正環,我們還可以調整光學系統以適應封裝介質的折射率變化,或者由于蓋玻片厚度溫度變(bian)化引起的折射率變化。


在本期中,我們深入了解了類器官成像領域,共聚焦顯微(wei)鏡物鏡的創新及其在觀(guan)測厚樣本中的重要應用。我們還探討了如何通過選擇與(yu)樣本折射率相匹配浸沒介質來解決成像挑戰。甘油物(wu)鏡的應用充分證明了技術發展如何促進了成像質(zhi)量(liang)和深度的提升,開辟了研究的新視野。


第二期我們將進一步探索類器官研究中的綜合成像解決方案,涵蓋自動(dong)化樣本定(ding)位、高倍率(lv)成像的(de)(de)自動(dong)轉換、三維結構的(de)(de)高分辨率(lv)成像,以及如何借助AI圖像分析軟件挖掘圖像中的(de)深(shen)層信息。


我們邀請您(nin)(nin)繼續與(yu)(yu)我們同行(xing),深入顯微(wei)成像技術的新領域,共同揭(jie)開細胞與(yu)(yu)生物(wu)分子(zi)研究(jiu)的新奧秘(mi)。敬請期(qi)待我們的下一期(qi)內容(rong),將為您(nin)(nin)帶(dai)來更(geng)多精彩洞(dong)見。


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圖3. 肺腺癌類器官樣本,共聚焦成像,40x 甘油鏡,DAPI-細胞核F-ACTIN-細胞膜,樣本來(lai)源伯楨生物bioGenous


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